Čarodějnice jsou poprvé představeny v Aktu 1, Scéna 3, když se na vřesovišti setkají s Macbethem a Banquom. Vítají Macbetha třemi proroctvími:že se stane Thanem z Cawdoru, Thanem z Glamis a králem Skotska. Banquo má také tři proroctví, ale nejsou tak konkrétní. Proroctví čarodějnic zasadí do Macbethovy mysli semena ctižádosti a on začne plánovat, jak je naplnit.
Čarodějnice se znovu objeví ve 3. aktu, scéně 5, když je Macbeth navštíví v jejich jeskyni. Ukazují mu řadu vizí, které představují jeho budoucnost a důsledky jeho činů. Čarodějnice také Macbethovi sdělí, že bude poražen „Birnam Woodem“ a „mužem nenarozeným z ženy“. Tato proroctví vedou Macbetha k přesvědčení, že je neporazitelný, a ve své honbě za mocí se stává ještě nelítostnějším.
Čarodějnice hrají zásadní roli v Macbethově pádu. Uvádějí do pohybu události, které vedou k jeho zničení, a poskytují mu falešný pocit bezpečí, který nakonec vede k jeho porážce. Čarodějky jsou mocná a nebezpečná síla a představují temnou stránku lidské povahy.
Kromě toho, že čarodějnice vytvářejí pocit tajemna a napětí, slouží také k komentování témat hry. Představují nadpřirozené síly, které mohou ovlivnit lidské chování, a ukazují, jak snadno lze lidi zkazit ambicemi a mocí. Čarodějnice jsou varováním pro diváky, že nekontrolované ambice mohou vést k tragickým následkům.