Kirby-Bauerova technika je standardní mikrobiologická metoda používaná ke stanovení citlivosti bakterií na antimikrobiální látky. Zahrnuje měření zóny inhibice růstu bakterií kolem disků impregnovaných antibiotiky umístěných na agarové plotně naočkované testovacím organismem. Zde jsou obecné kroky Kirby-Bauerovy techniky:
1. Příprava inokula :
- Získá se čistá kultura testovaného bakteriálního kmene a nechá se růst ve vhodném živném médiu, aby se dosáhlo logaritmické růstové fáze (zákal).
- Bakteriální suspenze je standardizována na specifický zákal, typicky ekvivalentní 0,5 McFarlandova standardu zákalu, aby byla zajištěna konzistentní hustota inokula.
2. Inokulace agarové desky :
- Pro test se použijí sterilní agarové plotny obsahující Mueller-Hintonův agar nebo jiné vhodné agarové médium.
- Pomocí sterilního vatového tamponu se standardizované inokulum rovnoměrně rozprostře po povrchu agarové plotny, aby se vytvořil souvislý trávník růstu bakterií.
- Inokulovaná plotna se nechá několik minut zaschnout, aby absorbovala přebytečnou vlhkost.
3. Aplikace Antibiotických disků :
- Sterilní antibiotické disky obsahující specifické koncentrace antimikrobiálních látek jsou umístěny na povrch agarové plotny v rovnoměrně rozmístěných intervalech pomocí sterilních pinzet nebo diskového dávkovače.
- Disky jsou jemně přitlačeny, aby byl zajištěn dobrý kontakt s povrchem agaru bez poškození disků.
4. Inkubace :
- Inokulovaná destička s antibiotickými disky se inkubuje při vhodné teplotě (obvykle 35-37°C) po určitou dobu (typicky 16-24 hodin), aby se umožnil růst bakterií a difúze antimikrobiálních látek.
5. Měření inhibičních zón :
- Po inkubaci se plotny vyšetřují na přítomnost inhibičních zón kolem antibiotických disků.
- Pomocí pravítka nebo digitálního posuvného měřítka se průměr každé zóny inhibice měří v milimetrech.
- Průměr zóny udává citlivost testovaného organismu na konkrétní antibiotikum.
6. Interpretace výsledků :
- Naměřené průměry zón se porovnají se standardizovanými tabulkami nebo směrnicemi, jako jsou ty, které poskytuje Institut pro klinické a laboratorní standardy (CLSI), aby se určila citlivost nebo odolnost testovacího organismu vůči testovaným antimikrobiálním látkám.
- Organismy jsou kategorizovány jako vnímavé, středně odolné nebo rezistentní na základě velikosti inhibičních zón a stanovených interpretačních kritérií.
7. Kontrola kvality :
- Aby byla zajištěna přesnost a spolehlivost Kirby-Bauerovy techniky, jsou do každé šarže testování zahrnuty kmeny pro kontrolu kvality se známými vzory citlivosti, aby bylo možné sledovat účinnost metody a použitých činidel.
Je důležité dodržovat standardizované postupy a interpretovat výsledky podle zavedených pokynů, abyste získali spolehlivé a klinicky relevantní informace z testování citlivosti na antibiotika Kirby-Bauer.