polyakrylamidovém gelu je připraven s otvory v něm . Tento gel je tvořen nalitím roztoku horké kapalné polyakrylamidovém do mělké krabice . Krabice by měla obsahovat comblike strukturu zubů, které ukazují dolů do roztoku . Polyakrylamidovém gelu se stane ihned poté, co je vylita ahřeben je možné odhalit obdélníkové otvory .
Dodecylsulfát sodný ( SDS )
protein se zpracuje dodecylsulfát sodný ( SDS ) , aby se denaturaci podjednotky velkého proteinu , takže každý z nich může být měřena samostatně . Mezi výhody tohoto je , žeSDS poskytuje polypeptidy záporný náboj , takže se budou migrovat směrem k záporné konci , nebo anody , gelu . Za druhé ,SDS zajišťuje, že všechny podjednotky bude mít stejný náboj , a proto budou všechny migrují v gelu podle jejich molekulové hmotnosti , místo poplatků .
Doplnění bílkovin
malé množství DNA nebo proteinu je umístěna v jednom z obdélníkových otvorů na jednom konci gelu . Elektrický proud protéká z gelu při neutrálním pH . Asi 10 ul DNA žebříku , jakož i dva ovládací prvky jsou rovněž vloženy do gelu . DNA žebřík slouží ke změření jak dalekovzorku pohyboval v procesu elektroforézy .
Elektroforéza
Stroj pak se otočil na 100 voltů a nechat běžet po dobu 30 minut . Poté, co byly vzorky podrobeny elektroforéze po dobu 30 minut ,gelu spolu s podnosem se odstraní a umístí do zásobníku pro barvení asi tři minuty . Poté následuje umístěním gelu v teplé vodě po dobu pěti minut . Gel je nyní připraven k uvedení na světelné pole , aby bylo možné pozorovat pohyb fragmentů DNA .
Další úvahy
Při prohlížení gel pod světla některé důležité věci by měly být vzaty v úvahu . Buňka může být buď heterozygotní nebo homozygotní pro gen v závislosti na tom, zda je přítomna nebo není přítomna v obou kopií , nebo jen v jednékopii . Heterozygotní výsledek se může objevit jako jediného pásu , protože se segmenty DNA , které jsou zesílené efektivněji tmavší v gelu . Barvivo je také přidána , takže každý polypeptid může být viděn během a po elektroforéze .